1.4 实验方法
1.4.1 菌种保存 在500 mL摇瓶中将重组菌接种到200 mL含50 mgL-1氨苄霉素和30 mgL-1卡那霉素的LB培养基(Luria-Bertani medium)中,在37℃下振荡培养至OD600约为4(振荡速率为170 min-1),在1.5 mL无菌微型离心管中加入870μL细菌培液中和130μL88 %的甘油,混合后用液氮速冷,然后保存在-80℃.
1.4.2 汞离子的生物富集 在1 000 mL摇瓶中装入300 mLLB培养液,加入50 mgL-1氨苄
霉素和30 mgL-1卡那霉素,然后接入1 mL细菌-甘油培养液,在37℃下振荡(振荡速率为170 min-1)培养至过夜.取少量菌液接种到相同的LB培养液中,使初始菌体密度为OD600值01~0.3,37℃下振荡培养至OD6000.5-0.7时添加诱导物异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至
终浓度为1.0 mM.再次振荡培养4 h,4℃下离心收获菌体待用.
菌体在使用前先用磷酸缓冲液洗涤,然后悬浮于含不同浓度汞离子的模拟电解废水中在37℃下振荡培养1 h,离心收集菌体.为测量菌体内所富集的汞离子含量,将收集的菌体干燥后用70%的高纯度硝酸溶液消化过夜.考察富集速率时,在不同的时间用0.2μm孔径的醋酸纤维膜收集菌体,以使菌体和处理液尽快分离开来.
由于重金属离子易于被容器器壁吸附而导致实验误差[8],实验中所用的所有导管和玻璃容器使用前都用20%的硝酸溶液浸泡过夜,然后用去离子水浸洗干净.